一、外觀

拿到血清，最先接觸的是血清外觀，對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說(shuō)，外觀的判斷尤為重要

1、顏色

根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實(shí)際上，血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響，這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國(guó)產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散，大多是由屠戶采血后馬上離心收集，所以很少會(huì)有溶血，表現(xiàn)出明亮的蠟黃色，當(dāng)然，國(guó)產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血，因?yàn)檎嬲奶ヅＱ迥δ懿睿t細(xì)胞容易破裂。總的來(lái)說(shuō)，國(guó)產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進(jìn)口的血清，質(zhì)量最好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色。當(dāng)然，熱滅活血清或保存不當(dāng)?shù)难澹捎谘t蛋白的破壞氧化，會(huì)呈現(xiàn)出暗紅，甚至咖啡色。

2、沉淀：很多血清客戶，會(huì)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀，從而懷疑血清的質(zhì)量問(wèn)題，這是沒(méi)有根據(jù)的。血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生，對(duì)血清質(zhì)量沒(méi)有任何影響，沉淀的產(chǎn)生原因很多，和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān)。國(guó)產(chǎn)的血清，大多來(lái)自北方，由于價(jià)格低廉，保存環(huán)境都不好，從采血、冷凍、運(yùn)輸?shù)缴a(chǎn)會(huì)經(jīng)過(guò)多次凍融，每次凍融過(guò)程，就會(huì)析出部分纖維蛋白沉淀，這樣，血清成品過(guò)濾后看起來(lái)反而更加的“干凈”，很少有沉淀產(chǎn)生。進(jìn)口的胎牛血清，過(guò)濾分裝前很少會(huì)反復(fù)凍融，生產(chǎn)后的成品也是清澈的，但隨著時(shí)間的推移，血清中的大量纖維蛋白會(huì)析出形成沉淀。當(dāng)然，進(jìn)口的新生牛血清，一般牛齡都在2周左右，血清中的各種蛋白含量明顯偏高，生產(chǎn)后血清可能會(huì)渾濁，甚至有大量沉淀。當(dāng)然，購(gòu)買(mǎi)回來(lái)的血清都是冰凍狀態(tài)，使用時(shí)需要融化，融化過(guò)程最好在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行，否則沉淀相對(duì)較多，雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量，但對(duì)細(xì)胞的顯微觀察有一定的阻礙。

3、澄清度進(jìn)口胎牛血清由于蛋白和脂類(lèi)等物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清淡，而國(guó)產(chǎn)血清，因?yàn)榻^大多數(shù)是新生牛血清，相對(duì)而言更加粘稠，顏色略深，這對(duì)于初步接觸血清的人很難判斷，但把兩者進(jìn)行對(duì)比，可容易分辨。

二、主要技術(shù)指標(biāo)

目前國(guó)內(nèi)血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是2005版的《中華人民共和國(guó)藥典》，主要指標(biāo)有以下幾點(diǎn)：

1、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml

內(nèi)毒素是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分，因此內(nèi)毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生產(chǎn)一系列過(guò)程中的無(wú)菌操作情況。目前，國(guó)產(chǎn)血清基本都能達(dá)到這一要求，很多進(jìn)口胎牛血清內(nèi)毒素含量反而更高，內(nèi)毒素含量偏高不影響質(zhì)量，除非含量極高，預(yù)示著已經(jīng)污染。

2、總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml

數(shù)值偏高，說(shuō)明采血的牛齡偏大，不是胎牛，數(shù)值偏低，表明血清可能摻水了。

3、血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl

顏色越紅，數(shù)值越高，反之，數(shù)值越低。

4、pH

國(guó)產(chǎn)血清、大多高于7.5，進(jìn)口胎牛血清，大多低于7.5，具體原因未知，可能和牛齡有關(guān)，這也能用來(lái)初步鑒別血清的來(lái)源。

5、微生物

包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類(lèi)病原性病毒等。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高，細(xì)菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經(jīng)過(guò)0.1um過(guò)濾，大多也能清除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的，主要是生產(chǎn)環(huán)境過(guò)程中帶入，又無(wú)法過(guò)濾，很難徹底清除，但對(duì)血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒，特別是BVDV，在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在，這類(lèi)微生物是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一，而進(jìn)口胎牛血清中基本都控制的很好。

6、免疫球蛋白

國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè)，結(jié)果也很不準(zhǔn)確，進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè)。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出采血的時(shí)的牛齡情況，國(guó)產(chǎn)血清，基本都是新生牛的，血清中容易產(chǎn)生IgM，IgG的含量也偏高，進(jìn)口胎牛血清，不含IgM，IgG的含量也較低。

7、其它

不管是國(guó)產(chǎn)還是進(jìn)口血清，都是不測(cè)抗生素的（無(wú)四環(huán)素胎牛血清除外）。國(guó)外，抗生素的使用很?chē)?yán)格，用量也很少，每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的，因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低；國(guó)內(nèi)，抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象，血清中殘留很高，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)極為不利，這是國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因。

三、血源

市場(chǎng)上的血清血源主要分為中國(guó)、北美、南美和澳洲。

1、國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差，這是公認(rèn)的，主要原因并不是生產(chǎn)廠家的責(zé)任，而是天然環(huán)境差和抗生素的大量使用。國(guó)內(nèi)環(huán)境污染嚴(yán)重，同時(shí)飼養(yǎng)過(guò)程中抗生素極其濫用，有毒有害物質(zhì)會(huì)大量殘留在血清中，最終不利于細(xì)胞的生長(zhǎng)。

2、南美血清，來(lái)源很多，如Bioind的巴拿馬、Gibco的烏拉圭、巴西等，這些血清由于采血的不可控性，質(zhì)量參差不齊，當(dāng)然，相對(duì)于國(guó)內(nèi)血清來(lái)說(shuō)好的多。另外，國(guó)內(nèi)銷(xiāo)售的南美血清大多顏色鮮紅，如Sera Pro、Bioind、Gibco、Hylone等品牌，但阿根廷的血清例外，這可能和各國(guó)的采血、生產(chǎn)工藝有關(guān)。

3、北美血清，主要來(lái)自美國(guó)和加拿大，如Sera Pro的S742S-500，Hclone的SH30396、SH30070、SH30071、Gibco的16000-044、26140-079等。這類(lèi)血清，等級(jí)越高的顏色越淡，表現(xiàn)為淡黃中帶一點(diǎn)微紅，SH30070和SH30396對(duì)比就很明顯，特級(jí)胎牛血清基本就能進(jìn)行干細(xì)胞培養(yǎng)。北美血清還有一個(gè)顯著特點(diǎn)就是每瓶血清都能溯源，這對(duì)一些大型的疫苗廠、藥廠尤為重要。

4、澳洲血清，來(lái)源主要是新西蘭和澳大利亞，這是在北美血清禁運(yùn)之后進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)的，一般不具有溯源功能，由于生產(chǎn)、運(yùn)輸?shù)仍颍瑑r(jià)格相對(duì)來(lái)說(shuō)比較貴。

四、血清使用常見(jiàn)問(wèn)題

1、血清保存的最好方法？

我們建議血清最好保存在-20℃保存。若一次使用不完一瓶，建議無(wú)菌分裝于適當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)冷凍備用。

2、如何解凍血清，才能保證其質(zhì)量不會(huì)受損？

我們建議將血清從冷凍箱取出后，置于2℃～8℃冰箱中解凍，然后在室溫下全融，解凍過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

3、為什么血清在解凍后會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀？應(yīng)該怎樣處理？

血清中絮狀沉淀產(chǎn)生的原因有很多，其中最普遍的還是由于血清中脂蛋白的變性所致，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后，也會(huì)存在于血清中，這也是造成沉淀的主要原因，但這些絮狀沉淀并不影響血清本身的質(zhì)量。欲去除沉淀，可采取自然沉降法或者將血清分裝于無(wú)菌離心管中，2000～3000rpm離心5min。一般不建議用過(guò)濾的方法去除絮狀沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)阻塞濾膜，造成過(guò)濾困難或無(wú)法過(guò)濾。

4、為什么要熱滅活血清？有必要熱滅活嗎？

加熱可以滅活血清中的補(bǔ)體系統(tǒng)，使補(bǔ)體去活化。通常未滅活的補(bǔ)體能夠刺激平滑肌收縮、肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放、激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，同時(shí)還能夠參與溶解細(xì)胞的過(guò)程。

諸多研究表明大多數(shù)細(xì)胞的培養(yǎng)無(wú)須進(jìn)行血清的熱滅活；而在免疫學(xué)研究和ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中，推薦使用熱滅活血清。實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)正確熱滅活處理的血清，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)或完全沒(méi)有促進(jìn)作用，而通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率降低。并且熱處理過(guò)的血清，沉淀物明顯增多，倒置顯微鏡下觀察呈“小黑點(diǎn)”，往往會(huì)使研究者誤以為是血清受到了污染，而把血清放于37℃中，沉淀物又會(huì)更增多，有會(huì)使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂增殖。因此我們建議若非必須，可以不進(jìn)行熱處理，既節(jié)省時(shí)間又確保質(zhì)量。

5、如何避免沉淀物的產(chǎn)生？

建議您在血清使用的過(guò)程中，采用正確的解凍方法（冷凍→4℃→室溫），若血清解凍時(shí)改變的溫度太大（如冷凍→37℃）非常容易產(chǎn)生沉淀物。溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)久、搖晃不均勻等，都會(huì)造成沉淀增多，我們建議如非必要無(wú)須對(duì)血清進(jìn)行滅活；若必須熱滅活，應(yīng)嚴(yán)格遵守56℃，30min的原則，并隨時(shí)搖晃均勻。

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